L'epatite C è un'infezione del fegato causata dal virus Flaviviridae HCV, che consiste in una o più molecole di RNA. Di norma, vengono prese una serie di misure diagnostiche per stabilire in un paziente l'epatite C. La PCR è un'analisi che conferma accuratamente la diagnosi. Spesso la conclusione viene fornita dai medici quando il paziente ha già i primi segni della malattia.
Cos'è l'epatite C
Il danno epatico causato da un'infezione virale trasmessa attraverso il sangue o il contatto sessuale è chiamato in medicina epatite C. L'agente eziologico è un virus contenente RNA di agenti infettivi non cellulari della famiglia dei Flaviviridae. L'infezione può rimanere nel corpo per molto tempo senza mostrarsi. Pertanto, solo quando un microrganismo viene rilevato utilizzando un esame del sangue utilizzando PCR RNA RNA, l'epatite C (come diagnosi) è considerata giustificata.
Flavivirus non viene prodotto in cellule isolate cresciute artificialmente. Nel processo di riproduzione, l'agente infettivo crea modifiche immunologicamente distinte. Questi fattori impediscono al corpo di darerisposta protettiva adeguata e gli esperti hanno difficoltà a sviluppare un vaccino efficace.
Il virus si trasmette per via parenterale. Per l'infezione, deve entrare in quantità sufficiente direttamente nel flusso sanguigno.
Quali test vengono eseguiti per l'epatite C
Le patologie virali del fegato vengono diagnosticate mediante test di laboratorio. Gli studi clinici sull'epatite C vengono condotti studiando antigeni o composti proteici (anticorpi) estranei e pericolosi nel biomateriale del paziente, principalmente nel sangue.
- Saggio immunoenzimatico (ELISA). Il metodo si basa sulla rilevazione degli anticorpi lgM nel sangue. L'immunoglobulina è considerata la più grande ed è un pentamero. Si manifesta nella risposta protettiva primaria dei linfociti a una sostanza estranea sconosciuta.
- Radioimmunoassay (RIA) - determinazione quantitativa dell'immunoglobulina lgM utilizzando un isotopo radioattivo marcato di iodio.
- PCR dell'epatite C - determinazione dell'RNA virale nel biomateriale (sangue). Questa analisi conferma in modo affidabile la diagnosi.
Il test IgG non è affidabile. La sua presenza nel siero del sangue può indicare non solo la presenza di un flavivirus, ma anche un' altra infezione passata che ha lo stesso patogeno.
Cosa determina l'analisi PCR
La reazione a catena della polimerasi (PCR) si basa sull'identificazione di regioni del DNA specifiche per determinati agenti patogeni in campioni di materiale per la ricerca (epitelio, sangue). L'analisi consente di identificare gli organismi patogeni più piccoli (virus) rilevando il loro RNA o DNA nel materiale biologico.
La procedura di laboratorio per il rilevamento degli anticorpi L'epatite C PCR si svolge in 3 fasi:
- Seleziona. Il biomateriale studiato viene purificato dalle impurità e il DNA viene ottenuto nella fase mobile della colonna cromatografica.
- Amplificazione. L'analisi viene effettuata nel termociclatore dispositivo. Riscalda e raffredda le provette con una certa ciclicità. Per uno studio, vengono eseguiti fino a 35 cicli. Il risultato è un numero sufficiente di frammenti di DNA per rilevare, identificare e valutare l'agente patogeno.
- Elettroforesi. I frammenti risultanti vengono posti in un gel con diversa saturazione di agarosio e viene eseguita l'elettroforesi. L'elettroferogramma risultante viene analizzato su un computer.
Non viene utilizzato solo lo studio PCR standard, ma anche l'analisi PCR in tempo reale. Questa è la diagnostica in tempo reale. Il metodo consente un'analisi qualitativa e quantitativa, che consente di identificare la formazione e la dinamica della malattia, nonché di prescrivere una terapia volta ad eliminare la causa all'origine della patologia. La PCR in tempo reale viene utilizzata anche per determinare una coltura pura di agenti infettivi (genotipizzazione).
Come viene eseguito il test di reazione a catena della polimerasi
Per la diagnosi, è possibile utilizzare qualsiasi fluido biologico umano. Il biomateriale per il test dell'epatite C è solitamente sangue.
Il campionamento per la diagnostica viene effettuato nella proceduraufficio. Per prelevare il sangue, utilizzare provette monouso con una sostanza che inibisce la coagulazione del sangue. Le attività incentrate sulla prevenzione della diffusione di agenti infettivi aiutano a evitare l'ingresso di un altro ceppo di microrganismi dall'esterno.
Il sangue per la PCR dell'epatite C viene prelevato al mattino a stomaco vuoto. Il campione viene inviato immediatamente al laboratorio. È consentito conservare il biomateriale a una temperatura compresa tra +4 e +8 gradi Celsius. I contenitori sono etichettati e forniti di istruzioni. I risultati dei test sono disponibili entro 48 ore, a volte prima.
Tipi di PCR
Il campo di applicazione della reazione a catena della polimerasi è piuttosto ampio. Gli infezionisti determinano mediante PCR l'epatite B, malattie trasmesse da insetti succhiatori di sangue, AIDS, tubercolosi. In oncologia, utilizzando questo metodo, le cellule tumorali vengono rilevate in una fase iniziale.
Ci sono circa quattordici tipi di analisi. L'uso dell'uno o dell' altro tipo dipende dall'ambito e dai risultati finali delle analisi. Alcuni tipi di PCR sono indispensabili quando il risultato è necessario entro 20 minuti.
Per diagnosticare l'epatite C, vengono utilizzati 3 tipi di reazione a catena della polimerasi:
- La valutazione qualitativa può essere positiva, indicando la presenza di un'infezione nel corpo, o negativa, indicando l'assenza di un flavivirus.
- PCR in tempo reale (analisi quantitativa) - determina l'RNA quantitativo del patogeno in UI/ml.
- La genotipizzazione è un'analisi che rivela il tipo (genotipo) del virus.
Per identificare e determinare con precisione la malattia, seguito datutti e tre i tipi di studi vengono utilizzati per prescrivere una terapia ottimale.
Analisi qualitativa della reazione a catena della polimerasi
Un'analisi è obbligatoria per tutti coloro che hanno un test ELISA che ha rilevato anticorpi contro l'HCV. La PCR qualitativa per l'epatite C è il test di suscettibilità standard. Il metodo è finalizzato esclusivamente al rilevamento, non viene eseguito il conteggio o l'isolamento di altre sostanze.
Per rilevare gli anticorpi, vengono utilizzati sistemi di test speciali con una soglia di sensibilità di almeno 50 UI/ml. Se vengono rilevati anticorpi, vengono prescritti altri test chiarificatori. Se il risultato è negativo, non verranno effettuati ulteriori test.
In alcuni casi, un risultato falso negativo potrebbe essere dovuto a personale di laboratorio incompetente o reagenti di scarsa qualità. Per l'assicurazione, è meglio riprendere l'analisi altrove.
PCR quantitativa
Il metodo viene utilizzato per studiare direttamente il numero di flavivirus in un ciclo di reazione. Per misurazioni accurate, vengono utilizzati frammenti di DNA utilizzati per l'ibridazione o primer etichettati in modo fluorescente. Esiste un'opzione di rilevamento economica che utilizza il colorante SYBL Green. Il colorante è incastrato in un piccolo solco nel DNA e diventa blu quando viene irradiato con un laser.
La concentrazione è determinata dall'apparecchio-amplificatore in equivalente digitale. I valori possono variare leggermente tra i laboratori e devono quindi essere confrontati con i valori di riferimento.
PCR quantitatival'epatite C aiuta a scegliere il dosaggio ottimale dei farmaci e a determinare la durata della terapia. La frequenza dello studio dipende dallo stadio della malattia, dal tipo di genotipo e dal corso di trattamento prescritto.
Determinazione del genotipo
Il virus dell'epatite C ha una composizione genetica variabile. Numerose modifiche rendono impossibile creare un vaccino e complicano anche la terapia. Sono stati identificati e registrati un totale di 11 genotipi e 100 sottotipi. Nei paesi dell'ex Unione Sovietica, nelle persone infette da epatite C, la PCR rileva principalmente i genotipi 1b e 3.
In presenza di uno qualsiasi dei genotipi, la cirrosi o il cancro al fegato possono scatenarsi. Ecco perché è così importante rilevare il virus in tempo.
Per alcuni pazienti, alcuni farmaci progettati per combattere l'HCV sono tossici. La genotipizzazione consente di determinare il tipo di proteina e di prescrivere un farmaco efficace.
Nei risultati dei test di tipizzazione c'è un numero con una lettera latina minuscola che indica il genotipo del virus. Se l'HCV viene rilevato ma non tipizzato, significa che la persona ha un genotipo non tipico per una determinata area geografica.
Risultati dell'analisi
Il dottore si occupa di decifrare i risultati. Solo i dati di diversi studi (insieme all'anamnesi e all'esame) possono fornire un quadro reale generale della storia medica.
- In una persona sana, un test per una reazione qualitativa nel biomateriale non rileva nulla. Se viene indicato il valore "rilevato", l'infezione è confermata e il pazientenecessita di ulteriore diagnosi seguita da trattamento.
- La determinazione del numero di agenti infettivi permette di valutare la carica virale sul corpo. Normalmente, la PCR quantitativa dell'epatite C non rileva l'agente patogeno. Un indicatore fino a 810^5 è considerato un carico basso e, con una terapia adeguata, garantisce un esito favorevole. Valori più elevati richiedono un esame approfondito e la determinazione della terapia a lungo termine, per l'esito positivo di cui nessuno può garantire.
- Risultati positivi della genotipizzazione indicano quale genotipo è riconosciuto. Un risultato negativo indica l'assenza di un flavivirus o la presenza di un genotipo non tipico di questa regione.
Cosa indica un test PCR positivo
Qualsiasi malattia grave richiede una diagnosi completa. Una PCR positiva per l'epatite C conferma la diagnosi, ma le previsioni possono essere fatte solo dopo ulteriori studi di laboratorio e strumentali.
Il rilevamento di un virus non fornisce un quadro completo della patologia. È necessario identificarne il tipo e la natura, per determinare come colpisce il fegato e altri organi. La diagnosi precoce dell'HCV ha spesso un esito terapeutico favorevole.
PCR negativa con ELISA positivo
Quando si osservano i sintomi caratteristici del danno epatico, c'è un' alta probabilità che l'infezione sia già entrata nel corpo. Pertanto, dovresti contattare un epatologo o uno specialista in malattie infettive. Durante i colloqui, lo specialista raccoglierà un'anamnesi e prescriverà l'esame necessario.
Sei risultati degli studi sulla PCR dell'epatite C sono negativi e il test immunoenzimatico è positivo, questo indica la presenza di anticorpi contro il flavivirus nel sangue. Questo di solito accade quando l'infezione entra nel corpo in una piccola quantità, quindi il sistema immunitario l'ha affrontata da solo. Ma queste persone sono ancora considerate infette e devono essere esaminate ogni 6 mesi. Se, con tali risultati del test, a una persona viene negata una visita medica gratuita, è meglio fare una PCR a pagamento per mantenere la salute e, se i risultati sono positivi, contattare uno specialista per la diagnosi e il trattamento.
Vantaggi e svantaggi del metodo
Quando si stabilisce la diagnosi di epatite C, la PCR presenta diversi vantaggi:
- Rilevamento precoce dell'agente patogeno.
- Definizione precisa del virus.
- Efficienza della diagnostica.
- Tasso di errore minimo.
- Alta sensibilità.
Svantaggi del metodo:
- Alto costo dell'analisi. Il test richiede apparecchiature costose, reagenti e personale medico altamente qualificato. Tutti insieme ammontano a un importo considerevole.
- Requisiti rigorosi per il trasporto di biomateriale.
Trattamento dell'infiammazione del fegato
L'analisi PCR per il virus dell'epatite C è considerata fondamentale per la diagnosi, ma non definitiva. Affinché la terapia sia efficace, sono necessari numerosi studi di laboratorio e strumentali aggiuntivi. Dopo aver passato tuttomisure diagnostiche il medico prescrive il trattamento:
- Viene prescritta la dieta 5.
- L'alcol è completamente escluso.
- Ricezione congiunta di interferone e ribavirina per 25 giorni.
- Corsi di epaprotettori "Essentiale", "Karsil", "Phosphogliv".
- In casi speciali, viene utilizzata la plasmaferesi discreta.
I medicinali prescritti da un epatologo vengono usati regolarmente, senza modificare il dosaggio. La durata dell'assunzione dei farmaci è determinata dal medico dopo aver superato i test di controllo. Dopo aver completato il corso della terapia, è necessario visitare il medico ogni sei mesi.
La diagnostica PCR consente di identificare l'agente eziologico dell'epatite C in una fase precoce. Ciò contribuisce all'efficacia della terapia e alla prevenzione della transizione della malattia in forme pericolose come la cirrosi e il carcinoma epatocellulare.
