Metodo colorimetrico - un'analisi basata sul confronto della saturazione del colore delle sostanze studiate e conosciute. I risultati dei test fisici e chimici sono di grande valore per molti rami della scienza, ma soprattutto la ricerca viene utilizzata in medicina.
L'essenza del metodo colorimetrico
Ci sono molti tipi di test che determinano la composizione chimica delle sostanze. Alcuni di essi sono universali e sono ampiamente utilizzati in vari campi, altri sono specifici, con maggiore precisione. Il metodo colorimetrico è universale.
L'essenza dell'analisi sta nel fatto che la saturazione del colore di una soluzione con una concentrazione sconosciuta viene confrontata con il colore di una soluzione standard. Durante l'analisi, a seguito dell'interazione del componente studiato con un determinato reagente, si forma un composto colorato. Dopo il completamento della reazione, la tonalità risultante viene confrontata con il colore delle soluzioni, la cui concentrazione è già nota.
Si ritiene che il fondatore della colorimetria sia Robert Boyle. Ha usato squeezetannini per distinguere il ferro dal rame in soluzione. Fu Boyle a notare che maggiore è la concentrazione di ferro nella soluzione, più ricco è il tono di quest'ultima.
Colorimetria
La colorimetria è un metodo per determinare la quantità di una sostanza nelle soluzioni. L'analisi si basa sulla legge di Bouguer-Lambert-Beer: quando un raggio di luce colpisce un denso strato assorbente di una sostanza, la sua intensità si indebolisce.
Il metodo colorimetrico per determinare la concentrazione di una sostanza può utilizzare un confronto visivo o un confronto utilizzando strumenti speciali per misurare l'intensità del colore. Il confronto avviene in modo diretto e compensativo.
- Dritto. Il metodo prevede il confronto del livello di colore della soluzione in esame a una certa densità e temperatura del liquido con una soluzione di riferimento. Quando si utilizzano fotocolorimetri e spettrofotometri, l'acqua distillata viene utilizzata come soluzione di riferimento. I dispositivi misurano l'intensità della corrente, che dipende dall'intensità della luce.
- Compensativo. Il metodo si basa sul portare il colore del campione studiato a quello di riferimento. Il risultato si ottiene aggiungendo un solvente o aumentando l' altezza dello strato del mezzo colorato.
L'uso di uno spettrofotometro, un monocromatore e altri strumenti di precisione semplifica ulteriormente il già semplice metodo di ricerca e consente di aumentare l'accuratezza dei risultati. Questi dispositivi sono in grado di misurare la quantità di trasmissione della luce e determinare la lunghezza d'onda.
Dove viene applicata l'analisi
Il metodo di analisi colorimetrico viene utilizzato quando è nota l'esatta composizione chimica, è presente un campione di riferimento per il confronto e la temperatura del test e del campione di riferimento è la stessa. Se è necessario determinare rapidamente la quantità di una sostanza colorata, ma è così piccola che è impossibile applicare il metodo analitico.
La colorimetria è ampiamente utilizzata in medicina per la ricerca biochimica clinica e in altre aree:
- industria farmaceutica;
- industria alimentare e alcolica;
- agronomia (determinazione della qualità del suolo).
Pro e contro
Il metodo colorimetrico, come qualsiasi altro, ha pro e contro.
I vantaggi includono quanto segue:
- facilità di analisi, procedure preparatorie minime;
- possibilità di test anche con una piccola quantità di materiale di prova;
- non c'è bisogno di apparecchiature costose, anche se ultimamente sono stati sempre più utilizzati dispositivi moderni e non economici. Ma forniscono il risultato più accurato.
Svantaggi: bassa accuratezza dell'analisi rispetto ai metodi analitici.
Metodo del biureto per la determinazione delle proteine
Le proteine nel siero del sangue sono un indicatore che riflette lo stato dell'omeostasi. Un aumento della concentrazione di un composto macromolecolare nel sangue è chiamato iperproteinemia, un basso contenuto è chiamato ipoproteinemia.
Proteine dentroil siero del sangue ha una diversa composizione, struttura, proprietà, svolge diverse funzioni. Sono divisi in enzimi, ormoni, immunoglobuline e altri. Tutti i gruppi di proteine hanno una serie di caratteristiche comuni, sulla base delle quali sono stati sviluppati metodi per la determinazione dei composti organici macromolecolari nei fluidi biologici.
Di tutti i metodi in biochimica clinica, i metodi colorimetrici per la determinazione delle proteine sono più spesso utilizzati. Sono relativamente economici, il che è importante per le organizzazioni di bilancio. e sono abbastanza semplici. Il più comune è il metodo del biureto. L'essenza del metodo: le proteine in un ambiente alcalino reagiscono con il solfato di rame e formano composti viola. Il contenuto proteico nel sangue è determinato dalla saturazione della colorazione. Il biomateriale per l'analisi viene prelevato al mattino a stomaco vuoto.
L'analisi è molto accurata, ma ci sono fattori che influenzano la concentrazione di proteine nel sangue:
- attività fisica poco prima del campionamento del biomateriale;
- ultime settimane di gravidanza e allattamento;
- l'uso dei farmaci Corticotropin, Miscleron, Clofibrate aumenta il contenuto proteico nel sangue e l'uso di pirazinamide ed estrogeni - per ridurre la concentrazione;
- Posizione errata della mano durante il campionamento del biomateriale.
Determinazione del ferro
La quantità di ferro nel sangue è uno dei principali indicatori nella diagnosi di varie malattie. La sostanza è concentrata in emoglobina, che assicura il trasporto di ossigeno ai tessuti. Perdeterminazione del ferro con il metodo colorimetrico, molto spesso, come reagente principale viene utilizzata una soluzione di batofenantrolina (0,02%). Biomateriale - siero senza tracce di emolisi.
L'essenza del metodo: l'interazione di ioni ferrosi e batofenantrolina solfato forma un complesso colorato, la cui saturazione è determinata fotometricamente. Per ottenere una soluzione limpida, è necessario seguire le regole per il campionamento del biomateriale, ma per determinare con precisione le densità ottiche dei complessi ferro-ligando, il ferro viene rilasciato dall'emoglobina utilizzando idrossilammina e detergenti (sodio dodecil solfato). Il risultato del test determina la presenza e il grado di patologia. La normale concentrazione di ferro dovrebbe essere:
- 14, 2 – 26,0 µmol/L (uomini);
- 10, 6- 21, 7 µmol/L (donne).
La carenza di ferro è solitamente associata a perdita di sangue, apporto dietetico inadeguato o scarso assorbimento dal tratto gastrointestinale.
Test del colesterolo
Il colesterolo è una sostanza organica che si trova nella parete cellulare di molti organismi, compreso l'uomo. È necessario per la produzione di colecalciferolo e ormoni steroidei. Un livello di colesterolo di 3,37-5,2 mmol/L è considerato normale. Il contenuto elevato è una delle principali cause di aterosclerosi.
I metodi colorimetrici per la determinazione del colesterolo consentono di riconoscere precocemente le malattie vascolari. Secondo i risultati patoanatomici nell'esito letale dell'ischemia, la concentrazione di alcol lipofilo nei pazientiera 6,5-7,8 mmol/L.
Il principio del metodo colorimetrico è che il colesterolo viene ossidato dalla 3beta-idrossi-steroide ossidoreduttasi, rilasciando perossido di idrogeno, che converte la p-aminoatipirina in un composto colorato. Il contenuto di colesterolo è determinato dalla saturazione del suo colore.
Quando si esegue un test su un bambino, si deve tenere conto del fatto che la concentrazione di colesterolo nell'infanzia non deve superare 4,1 mmol / l.
Qual è il metodo colorimetrico enzimatico?
I test enzimatici si basano sull'uso di reazioni da parte di enzimi ad alta attività. Sono ampiamente utilizzati in chimica analitica per determinare varie sostanze, dagli ioni nitrato alle macromolecole.
I metodi enzimatici (enzimatici) sono specifici, consentendo l'analisi di determinate sostanze in presenza di altre sostanze simili nella composizione. I metodi più comuni basati sull'uso dell'enzima - glucosio ossidasi. Il test viene utilizzato per determinare la concentrazione di glucosio nel sangue. L'accuratezza del test ne consente l'utilizzo per aggiustare il dosaggio degli ipoglicemizzanti nei pazienti con diabete di tipo 2.
Il metodo dell'ossidante del glucosio è considerato uno dei migliori metodi quantitativi per la determinazione del glucosio. Sia il sangue (capillare) che il siero possono essere utilizzati come biomateriale, ma il plasma è preferibile perché ha un contenuto di ematocrito inferiore, che influisce negativamente sull'accuratezza del risultato.
Si utilizza principalmente il metodo cinetico della fotometria. La sua essenza sta nel fatto cheil rapporto stabilito tra glucosio ossidasi e perossidasi, per un certo periodo di tempo dopo l'inizio della reazione, la velocità di formazione di un composto colorato sarà commisurata al livello di glucosio nel campione. Il principale vantaggio del test è che il risultato non è influenzato dalla presenza di composti di terze parti nel campione. Il metodo ha anche uno svantaggio: per il test sono necessari costosi strumenti di misura di produttori tedeschi o svedesi.
Conclusione
Il metodo colorimetrico è accurato e facile da usare. Il suo uso in medicina consente la diagnosi precoce di vari cambiamenti patologici nel corpo. Con l'introduzione di nuove tecnologie, il metodo viene migliorato e sta diventando sempre più popolare.
