Di recente è stato sviluppato un metodo affidabile, altamente sensibile e veloce per diagnosticare varie malattie infettive umane. Questo metodo è chiamato "analisi PCR". Che cos'è, qual è la sua essenza, quali microrganismi può rivelare e come prenderlo correttamente, lo diremo nel nostro articolo.
Cronologia delle scoperte
Ha inventato il metodo della reazione a catena della polimerasi (PCR) dallo scienziato americano Kary Mullis nel 1983. Inizialmente, il metodo diagnostico è stato brevettato dalla Cetus Corporation, in cui ha lavorato il suo creatore. Ma nel 1992 tutti i diritti e i brevetti furono venduti a Hoffman-La Roche. Successivamente, si è scoperto che studi simili sono stati condotti in parallelo e sono stati registrati da altri biologi americani, come Alice Chen, David Edgar, John Trell. Nel 1980, anche gli scienziati sovietici A. Slyusarenko, A. Kaledin e S. Gorodetsky hanno affrontato questo problema. Pertanto, era impossibile determinare l'unico titolare del copyright. Molti importanti biochimici hanno dato un certo contributo allo sviluppo della tecnica di reazione a catena della polimerasi e hanno brevettato le loro innovazioni. Allo stato attuale, l'analisiLa PCR viene eseguita ovunque in laboratori appositamente attrezzati.
L'essenza del metodo diagnostico PCR
Analisi PCR: cos'è e come funziona? L'essenza del metodo è aumentare il volume di un determinato ambiente microbico in condizioni artificiali utilizzando uno speciale enzima DNA polimerasi. Per questo, il materiale del DNA esistente viene moltiplicato molte volte. Pertanto, in presenza di un microrganismo patogeno nel campione, la sua quantità aumenterà a causa delle manipolazioni biochimiche di laboratorio e non sarà difficile rilevare il batterio al microscopio.
Come si fa la ricerca sui materiali?
Richiesto per l'analisi:
- Matrice DNA;
- primer che collegano le estremità di un pezzo di materiale;
- enzima DNA polimerasi resistente al calore;
- sostanze chimiche che fanno funzionare correttamente gli enzimi;
- soluzione tampone necessaria per creare le condizioni appropriate per la crescita e lo sviluppo del materiale del DNA.
Per eseguire la PCR, vengono eseguite 25-30 ripetizioni, composte da tre fasi: denaturazione, ricottura e allungamento.
Per l'analisi della reazione a catena del polimero, viene utilizzato un dispositivo speciale: un amplificatore. Le moderne apparecchiature consentono di impostare il programma necessario per i tubi di riscaldamento e raffreddamento per eliminare gli errori durante la diagnostica.
Dove viene utilizzata la diagnostica?
Il metodo di reazione a catena dei polimeri è utilizzato in vari campi della medicina:
- criminalisti conidentifica materiale genetico come capelli, saliva o sangue;
- L'analisi del sangue PCR aiuta con la genotipizzazione, ad esempio, per rilevare una reazione geneticamente inerente a un determinato farmaco;
- utilizzare questo metodo per stabilire la presenza di legami familiari tra le persone;
- Il metodo PCR più popolare è diventato nella diagnostica medica per determinare varie malattie infettive.
Quali infezioni rileva la PCR?
Quindi, la medicina ha utilizzato a lungo e con successo l'analisi PCR. Di cosa si tratta, lo sappiamo già. E quali agenti patogeni possono essere rilevati con esso? Le seguenti malattie infettive vengono diagnosticate con il metodo PCR:
- epatite A, B, C;
- ureaplasmosi;
- candidosi;
- clamidia;
- micoplasmosi;
- gardnerellosi;
- mononucleosi infettiva;
- tricomoniasi;
- infezione da papillomavirus;
- tubercolosi;
- infezione da herpes di tipo 1 e 2;
- elicobatteriosi;
- citomegalovirus;
- difterite;
- salmonellosi;
- Infezione da HIV.
Inoltre, i metodi PCR sono usati nella diagnosi del cancro.
Vantaggi del metodo
La diagnostica PCR presenta diversi vantaggi:
- Alta sensibilità. Anche in presenza di poche molecole di DNA di microrganismi, l'analisi PCR determina la presenza di infezione. Il metodo aiuterà con malattie croniche e latenti. Spesso in questi casi, il microrganismoè altrimenti incoltivabile.
- Qualsiasi materiale è adatto alla ricerca, come saliva, sangue, secrezioni genitali, capelli, cellule epiteliali. Il più comune è l'analisi del sangue e dello striscio urogenitale per la PCR.
- Nessun raccolto a lungo termine richiesto. Il processo diagnostico automatizzato consente di ottenere i risultati dello studio dopo 4-5 ore.
- Il metodo è affidabile quasi al 100%. Sono stati registrati solo casi isolati di risultati falsi negativi.
- La capacità di identificare diversi tipi di agenti patogeni da un singolo campione di materiale. Ciò non solo accelera il processo di diagnosi della malattia, ma riduce anche significativamente i costi dei materiali. Spesso il medico prescrive un'analisi PCR completa. Il prezzo dell'esame, che consiste nella determinazione di sei agenti patogeni, è di circa 1.500 rubli.
Raccomandazioni per la preparazione per l'analisi
Affinché i risultati siano affidabili durante lo studio PCR, è necessario sostenere il test, seguendo le raccomandazioni per la preparazione preliminare alla diagnosi:
- Prima di donare la saliva, dovresti astenerti dal mangiare e assumere medicinali 4 ore prima del prelievo. Immediatamente prima della procedura, sciacquare la bocca con acqua bollita.
- Le regole di cui sopra dovrebbero essere seguite anche quando si preleva un campione dalla superficie interna della guancia. Dopo il risciacquo, si consiglia di effettuare un leggero massaggio cutaneo per evidenziare la secrezione della ghiandola.
- L'urina viene solitamente raccolta a casa. Per fare questo, è necessario condurre un bagno completogenitali. Raccogliere 50-60 ml di urina in un contenitore di plastica sterile. Per garantire la purezza del materiale, si consiglia alle donne di inserire un tampone nella vagina e agli uomini di tirare indietro la piega della pelle il più possibile. Non donare durante il ciclo.
- Per donare lo sperma, devi astenerti dai rapporti sessuali per 3 giorni prima del prelievo. I medici sconsigliano inoltre di visitare la sauna e fare un bagno caldo, bere alcolici e cibi piccanti. Devi astenerti dall'urinare 3 ore prima del test.
- Per eseguire uno striscio urogenitale, ad esempio, se viene eseguito un test PCR per la clamidia, si consiglia a uomini e donne di avere un riposo sessuale per 3 giorni. I farmaci antibatterici non devono essere assunti 2 settimane prima dell'analisi. Per una settimana, devi smettere di usare gel intimi, unguenti, supposte vaginali, lavande. 3 ore prima dell'esame, è necessario astenersi dall'urinare. Durante le mestruazioni, il prelievo non viene effettuato, solo 3 giorni dopo la cessazione delle secrezioni di sangue, è possibile eseguire uno striscio urogenitale.
PCR durante la gravidanza
Durante il periodo di attesa del bambino, molte infezioni sessualmente trasmissibili sono estremamente pericolose per il normale sviluppo del feto. Le malattie sessualmente trasmissibili possono provocare ritardo della crescita intrauterina, aborto spontaneo o parto prematuro, malformazioni congenite del bambino. Pertanto, è estremamente importante sottoporsi a un esame PCR all'inizio della gravidanza. È necessario superare l'analisi al momento della registrazione - fino a 12 settimane.
Il materiale viene prelevato dal canale cervicale utilizzando un apposito spazzolino. La procedura è indolore e non rappresenta un pericolo per il bambino. Di solito durante la gravidanza, viene eseguita un'analisi per la clamidia con il metodo PCR, nonché per l'ureaplasmosi, la micoplasmosi, il citomegalovirus, l'herpes, il papillomavirus. Un tale complesso di esami è chiamato PCR-6.
PCR per la diagnosi di HIV
A causa del fatto che il metodo di reazione a catena della polimerasi è molto sensibile ai cambiamenti nel corpo e alle condizioni della diagnosi, molti fattori possono influenzare il risultato. Pertanto, l'analisi PCR per l'infezione da HIV non è un metodo affidabile, la sua efficienza è del 96-98%. Nel restante 2-4% dei casi, il test dà risultati falsi positivi.
Ma in alcune situazioni, la diagnostica HIV PCR è indispensabile. Di solito viene somministrato a persone con un risultato ELISA falso negativo. Tali indicatori indicano che una persona non ha ancora sviluppato anticorpi contro il virus e non possono essere rilevati senza un aumento multiplo del numero. Questo è esattamente ciò che si può ottenere effettuando un esame del sangue PCR.
Queste diagnosi sono necessarie anche per i bambini del primo anno di vita nati da una madre sieropositiva. Il metodo è l'unico modo per determinare in modo affidabile lo stato di un bambino.
PCR per la diagnosi di epatite
Il metodo di reazione a catena della polimerasi consente di rilevare il DNA del virus dell'epatite A, B, C molto prima della formazione degli anticorpi contro l'infezione o dell'insorgenza dei sintomi della malattia. L'analisi PCR per l'epatite C è particolarmente efficace, poiché nell'85% dei casi questa malattia è asintomatica e senzail trattamento tempestivo entra nella fase cronica.
Il rilevamento tempestivo dell'agente patogeno aiuterà a evitare complicazioni e trattamenti a lungo termine.
Esame PCR completo
Analisi PCR complessa: che cos'è? Questo è un esame che utilizza il metodo della reazione a catena polimerica, che include la determinazione di diversi tipi di infezioni contemporaneamente: micoplasma genitalium, mycoplasma hominis, gardnerella vaginalis, candida, trichomonas, citomegalovirus, ureaplasma urealiticum, herpes di tipo 1 e 2, gonorrea, papillomavirus. Il prezzo di tale diagnostica varia da 2000 a 3500 rubli. a seconda della clinica, dei materiali e delle attrezzature utilizzate, nonché del tipo di analisi: qualitativa o quantitativa. Cosa è necessario nel tuo caso - deciderà il medico. In alcuni casi è sufficiente determinare la presenza dell'agente patogeno, in altri, ad esempio, con l'infezione da HIV, un titolo quantitativo gioca un ruolo importante. Quando si diagnosticano tutti i suddetti agenti patogeni, l'esame viene chiamato "analisi PCR-12".
Trascrizione dei risultati dell'analisi
Decifrare l'analisi PCR non è difficile. Ci sono solo 2 scale dell'indicatore: "risultato positivo" e "risultato negativo". Quando viene rilevato un agente patogeno, i medici possono confermare la presenza della malattia con una certezza del 99% e iniziare a curare il paziente. Con un metodo quantitativo per determinare l'infezione, la colonna corrispondente indicherà l'indicatore numerico dei batteri rilevati. Solo un medico può determinare l'entità della malattia e prescrivere il trattamento necessario.
In alcuni casi, ad esempio, quando si determina l'infezione da HIV mediante PCR, con esito negativo, diventa necessario condurre ulteriori esami per confermare gli indicatori ottenuti.
Dove fare il test?
Dove fare un test PCR: in una clinica pubblica o in un laboratorio privato? Sfortunatamente, nelle istituzioni mediche municipali, le attrezzature ei metodi sono spesso obsoleti. Pertanto, è meglio dare la preferenza a laboratori privati con attrezzature moderne e personale altamente qualificato. Inoltre, in una clinica privata, otterrai risultati molto più velocemente.
A Mosca, molti laboratori privati offrono analisi PCR per varie infezioni. Ad esempio, in cliniche come Vita, Complex Clinic, Happy Family, Uro-Pro, viene eseguita l'analisi PCR. Il prezzo dell'esame è di 200 rubli. per identificare un agente patogeno.
Si può concludere che la diagnosi di malattie infettive mediante PCR nella maggior parte dei casi è un modo rapido e affidabile per rilevare l'agente patogeno nel corpo nelle prime fasi dell'infezione. Tuttavia, in alcuni casi, vale la pena scegliere altri metodi diagnostici. Solo uno specialista può determinare la necessità di tale studio. Decifrare l'analisi PCR richiede anche un approccio professionale. Segui i consigli del tuo medico e non fare esami che non ti servono.
