Lo studio dei batteri è di grande importanza pratica per l'uomo. Ad oggi è stato scoperto un gran numero di procarioti, che differiscono tra loro per patogenicità, area di distribuzione, forma, dimensione, numero di flagelli e altri parametri. Per studiare questo ceppo in dettaglio, viene utilizzato un metodo di ricerca batteriologica.
Quali sono i metodi per analizzare le cellule batteriche?
Per determinare se i batteri sono patogeni, la coltura viene esaminata in vari modi. Tra questi:
1. Metodo batterioscopico.
2. Metodo batteriologico.
3. Metodo biologico.
I metodi di ricerca batterioscopica e batteriologica si basano direttamente sul lavoro con le cellule procariotiche, quando l'analisi biologica è necessaria per studiare l'effetto di tali cellule sull'organismo vivente degli animali da esperimento. Secondo il grado di manifestazione di alcuni segni della malattia, lo scienziato può fareconclusione sulla presenza o assenza di batteri patogeni nel campione, oltre a propagarli naturalmente nel corpo dell'animale per ottenere la loro coltura e utilizzarli in altri lavori.
Il metodo di ricerca batteriologico differisce da quello batterioscopico. Nella prima si utilizza per l'analisi una coltura di procarioti viventi appositamente preparata, mentre nella seconda si lavora con cellule morte o vive su un vetrino.
Le fasi del metodo di ricerca batteriologica. Microbiologia
Il principio dello studio delle proprietà di una coltura batterica può essere utile sia per i microbiologi che si sono posti l'obiettivo di studiare le cellule procariotiche, sia per i tecnici di laboratorio il cui compito è stabilire la patogenicità o non patogenicità dei batteri, e quindi diagnosticare il paziente.
Il metodo di studio dei batteri è diviso in tre fasi:
1. Isolamento dei batteri dal campione originale.
2. Seminare batteri e coltivare una coltura pura, studiarne le proprietà.
3. Studio dettagliato delle cellule batteriche.
Prima fase
Il campione, o striscio, viene prelevato dalla superficie libera del mezzo o dal paziente. Pertanto, otteniamo un "cocktail" di molti tipi di batteri che devono essere seminati su un mezzo nutriente. A volte diventa possibile isolare immediatamente i batteri necessari, conoscendo i loro fuochi di distribuzione nel corpo.
Dopo due o tre giorni, vengono selezionate le colonie desiderate evengono seminati su supporti solidi di piastre Petri con l'aiuto di un'ansa sterile. Molti laboratori lavorano con provette, che possono contenere mezzi nutritivi solidi o liquidi. Così si realizza il metodo batteriologico della ricerca in microbiologia.
Secondo stadio
Dopo aver ottenuto singole colonie di batteri, viene eseguita una macro e microanalisi diretta. Tutti i parametri delle colonie vengono misurati, viene determinato il colore e la forma di ciascuno di essi. Non è raro contare le colonie su una capsula di Petri e poi nel materiale di partenza. Questo è importante nell'analisi dei batteri patogeni, il cui numero dipende dal grado della malattia.
Il metodo di ricerca batteriologico, il cui secondo stadio consiste nello studio delle singole colonie di microrganismi, può essere associato a un metodo biologico per l'analisi dei batteri. Un altro obiettivo del lavoro in questa fase è aumentare la quantità di materiale di partenza. Questo può essere fatto su un mezzo nutritivo, oppure puoi condurre un esperimento in vivo su organismi sperimentali viventi. I batteri patogeni si moltiplicheranno e, di conseguenza, il sangue conterrà milioni di cellule procariotiche. È facile preparare il materiale di lavoro necessario dei batteri dal sangue prelevato.
Terza fase
La parte più importante dello studio è la determinazione delle proprietà morfologiche, biochimiche, tossigene e antigeniche della coltura batterica. Il lavoro viene eseguito con colture pre-pulite su un mezzo nutritivo, nonché con preparazioni (spesso colorate) al microscopio.
Imposta la proprietàbatteri patogeni o opportunistici all'uno o all' altro gruppo sistematico, oltre a determinare la loro resistenza ai farmaci, consente il metodo di ricerca batteriologico. Fase 3 - antibiotici, ad es. analisi del comportamento delle cellule batteriche nelle condizioni del contenuto di farmaci nell'ambiente.
Lo studio della resistenza agli antibiotici di una coltura è di grande importanza pratica quando è necessario prescrivere i farmaci necessari e, soprattutto, efficaci per un particolare paziente. È qui che il metodo di ricerca batteriologica può aiutare.
Cos'è un mezzo di crescita?
Per lo sviluppo e la riproduzione, i batteri devono trovarsi in mezzi nutritivi pre-preparati. Per consistenza, possono essere liquidi o solidi e per origine - vegetale o animale.
Requisiti multimediali di base:
1. Sterilità.
2. Massima trasparenza.
3. Indicatori ottimali di acidità, pressione osmotica, attività dell'acqua e altri valori biologici.
Ottenere colonie isolate
1. Metodo Drygalsky. Consiste nel fatto che sull'ansa batterica viene applicato uno striscio con vari tipi di microrganismi. Questo ciclo viene passato lungo la prima capsula di Petri con un mezzo nutritivo. Inoltre, senza modificare il ciclo, il metodo del materiale residuo viene eseguito sulla seconda e terza piastra Petri. Quindi, sugli ultimi campioni della colonia, i batteri non verranno seminati troppo densamente, semplificando così la capacità di trovare quelli necessari per il lavoro.batteri.
2. Metodo Koch. Utilizza provette con mezzo nutritivo fuso. Lì viene posizionato un anello o una pipetta con una macchia di batteri, dopodiché il contenuto della provetta viene versato su una piastra speciale. L'agar (o gelatina) si solidifica dopo qualche tempo ed è facile trovare le colonie cellulari desiderate nel suo spessore. È importante diluire la miscela di batteri nelle provette prima di iniziare il lavoro in modo che la concentrazione di microrganismi non sia troppo elevata.
Il metodo di ricerca batteriologico, le cui fasi si basano sull'isolamento della coltura batterica desiderata, non può fare a meno di questi due metodi per trovare colonie isolate.
Antibiogramma
Visivamente, la reazione dei batteri ai farmaci può essere vista in due modi pratici:
1. Metodo del disco di carta.
2. Allevamento di batteri e antibiotici in un mezzo liquido.
Il metodo del disco di carta richiede una coltura di microrganismi cresciuti su un terreno nutriente solido. Su un tale supporto metti alcuni pezzi di carta arrotondata imbevuti di antibiotici. Se il farmaco riesce a far fronte con successo alla neutralizzazione delle cellule batteriche, dopo tale trattamento ci sarà un'area priva di colonie. Se la reazione all'antibiotico è negativa, i batteri sopravviveranno.
Nel caso di utilizzo di un mezzo nutritivo liquido, preparare prima diverse provette con una coltura di batteri di diverse diluizioni. Gli antibiotici vengono aggiunti a queste provette e durante il giorno si osserva il processo di interazione tra la sostanza e i microrganismi. Di conseguenza, si ottiene un antibiogramma di alta qualità, secondo il quale è possibilegiudicare l'efficacia del farmaco per un determinato raccolto.
Principali compiti di analisi
Qui elenca gli obiettivi e le fasi del metodo di ricerca batteriologica.
1. Ottenere il materiale di partenza che verrà utilizzato per isolare le colonie batteriche. Può essere una macchia sulla superficie di qualsiasi oggetto, membrana mucosa o cavità di un organo umano, un esame del sangue.
2. Coltivazione di colture su terreno nutritivo solido. Dopo 24-48 ore, sulla capsula di Petri si possono trovare colonie di diversi tipi di batteri. Selezioniamo quello desiderato in base a criteri morfologici e/o biochimici e con esso eseguiamo ulteriori lavori.
3. Propagazione della cultura risultante. Il metodo di ricerca batteriologica può essere basato su un metodo meccanico o biologico per aumentare il numero di colture batteriche. Nel primo caso, il lavoro viene eseguito con mezzi nutritivi solidi o liquidi, sui quali i batteri si moltiplicano in un termostato e formano nuove colonie. Il metodo biologico richiede condizioni naturali per aumentare il numero di batteri, quindi qui l'animale da esperimento viene infettato da microrganismi. Dopo alcuni giorni, molti procarioti possono essere trovati in un campione di sangue o in uno striscio.
4. Lavorare con la cultura purificata. Per determinare la posizione sistematica dei batteri, nonché la loro appartenenza ai patogeni, è necessario condurre un'analisi approfondita delle cellule in base alle caratteristiche morfologiche e biochimiche. Quando si studiano gruppi patogeni di microrganismi, è importante saperequanto sono efficaci gli antibiotici.
Questa era una caratteristica generale del metodo di ricerca batteriologica.
Caratteristiche dell'analisi
La regola principale della ricerca batteriologica è la massima sterilità. Se si lavora con provette, colture e sottocolture di batteri devono essere eseguite solo su una lampada ad alcool riscaldata.
Tutte le fasi del metodo di ricerca batteriologica richiedono l'uso di un'apposita ansa o di una pipetta Pasteur. Entrambi gli strumenti devono essere pretrattati alla fiamma di una lampada ad alcool. Per quanto riguarda la pipetta Pasteur, qui, prima della sterilizzazione termica, è necessario rompere la punta della pipetta con una pinzetta.
Anche la tecnica di semina dei batteri ha le sue caratteristiche. In primo luogo, durante l'inoculazione su terreno solido, un'ansa batterica viene fatta passare sulla superficie dell'agar. Il ciclo, ovviamente, dovrebbe già avere un campione di microrganismi sulla superficie. Viene anche praticata l'inoculazione nel mezzo di coltura, nel qual caso l'ansa o la pipetta devono raggiungere il fondo della capsula Petri.
Quando si lavora con fluidi liquidi, vengono utilizzate provette. In questo caso è importante assicurarsi che i liquidi non tocchino i bordi della vetreria di laboratorio o i tappi e che gli strumenti utilizzati (pipette, loop) non tocchino oggetti e superfici estranei.
L'importanza del metodo di ricerca biologica
L'analisi dei campioni di batteri ha le sue applicazioni pratiche. In primisil metodo di ricerca batteriologica può essere utilizzato in medicina. Ad esempio, è necessario studiare la microflora del paziente per stabilire la diagnosi corretta e sviluppare il corretto corso del trattamento. Un antibiogramma aiuta qui, che mostrerà l'attività dei farmaci contro l'agente patogeno.
L'analisi dei batteri viene utilizzata in laboratorio per rilevare malattie pericolose come la tubercolosi, la febbre ricorrente o la gonorrea. Viene anche utilizzato per studiare la composizione batterica delle tonsille, cavità d'organo.
Il metodo di ricerca batteriologica può essere utilizzato per determinare la contaminazione dell'ambiente. Secondo i dati sulla composizione quantitativa e qualitativa di uno striscio dalla superficie di un oggetto, viene determinato il grado di popolazione di questo ambiente da parte di microrganismi.
