La diagnosi di laboratorio di quasi tutte le malattie infettive si basa sulla rilevazione degli anticorpi nel sangue del paziente, che vengono prodotti contro gli antigeni del patogeno, mediante i metodi delle reazioni sierologiche. Entrarono nella pratica medica tra la fine del XIX e l'inizio del XX secolo.
Lo sviluppo della scienza ha aiutato a determinare la struttura antigenica dei microbi e le formule chimiche delle loro tossine. Ciò ha permesso di creare sieri non solo terapeutici, ma anche diagnostici. Si ottengono somministrando agenti patogeni attenuati ad animali da laboratorio. Dopo diversi giorni di esposizione, il sangue di conigli o topi viene utilizzato per preparare preparati utilizzati per identificare i microbi o le loro tossine mediante test sierologici.
La manifestazione esterna di tale reazione dipende dalle condizioni della sua ambientazione e dallo stato degli antigeni nel sangue del paziente. Se le particelle microbiche sono insolubili, precipitano, lisano, si legano o immobilizzano nel siero. Se gli antigeni sono solubili, compare il fenomeno della neutralizzazione o della precipitazione.
Reazione di agglutinazione (RA)
Il test di agglutinazione sierologica è altamente specifico. È facile da eseguire e abbastanzavisivo, per determinare rapidamente la presenza di antigeni nel siero del sangue del paziente. Viene utilizzato per testare la reazione di Vidal (diagnosi di febbre tifoide e paratifo) e Weigl (febbre tifoide).
Si basa su una specifica interazione tra anticorpi umani (o agglutinine) e cellule microbiche (agglutenogeni). Dopo la loro interazione, si formano particelle che precipitano. Questo è un segno positivo. Agenti microbici vivi o uccisi, funghi, protozoi, cellule del sangue e cellule somatiche possono essere utilizzati per avviare la reazione.
Chimicamente, la reazione è divisa in due fasi:
- Collegamento specifico di anticorpi (AT) con antigeni (AG).
- Non specifico - precipitazione di conglomerati AG-AT, ovvero la formazione di agglutinato.
Reazione di agglutinazione indiretta (IPHA)
Questa reazione è più sensibile della precedente. È usato per diagnosticare malattie causate da batteri, parassiti intracellulari e protozoi. È così specifico che possono essere rilevate anche concentrazioni molto basse di anticorpi.
Per la sua produzione vengono utilizzati eritrociti di pecora purificati e globuli rossi umani pretrattati con anticorpi o antigeni (a seconda di ciò che il tecnico di laboratorio vuole trovare). In alcuni casi, i globuli rossi umani vengono trattati con immunoglobuline. Le reazioni sierologiche degli eritrociti si considerano avvenute se si sono depositate sul fondo della provetta. A proposito di una reazione positivadiciamo quando le celle sono disposte a forma di ombrello rovesciato, occupando l'intero fondo. Viene conteggiata una reazione negativa se gli eritrociti si sono depositati in una colonna o sotto forma di un bottone al centro del fondo.
Reazione di precipitazione (RP)
Reazioni sierologiche di questo tipo vengono utilizzate per rilevare particelle di antigeni estremamente piccole. Questi possono essere, ad esempio, proteine (o parti di esse), composti di proteine con lipidi o carboidrati, parti di batteri, loro tossine.
I sieri per la reazione sono ottenuti infettando artificialmente animali, solitamente conigli. Con questo metodo, puoi ottenere assolutamente qualsiasi siero precipitante. L'impostazione delle reazioni di precipitazione sierologica è simile nel meccanismo d'azione alle reazioni di agglutinazione. Gli anticorpi contenuti nel siero si combinano con gli antigeni in una soluzione colloidale, formando grandi molecole proteiche che si depositano sul fondo della provetta o sul substrato (gel). Questo metodo è considerato altamente specifico e può rilevare quantità anche trascurabili di una sostanza.
Utilizzato per diagnosticare peste, tularemia, antrace, meningite e altre malattie. Inoltre, è coinvolto in una visita medica forense.
Reazione alla precipitazione del gel
Le reazioni sierologiche possono essere eseguite non solo in un mezzo liquido, ma anche in gel di agar. Questo è chiamato il metodo della precipitazione diffusa. Con il suo aiuto, viene studiata la composizione di complesse miscele antigeniche. Questo metodo si basa sulla chemiotassi degli antigeni rispetto agli anticorpi e viceversa. In un gel si muovonol'uno verso l' altro a velocità diverse e, incontrandosi, formano linee di precipitazione. Ogni riga è un insieme di AG-AT.
Reazione di neutralizzazione dell'esotossina con l'antitossina (PH)
I sieri antitossici sono in grado di neutralizzare l'azione dell'esotossina prodotta dai microrganismi. Queste reazioni sierologiche si basano su questo. La microbiologia utilizza questo metodo per titolare sieri, tossine e tossoidi e determina la loro attività terapeutica. Il potere di neutralizzazione delle tossine è determinato dalle unità convenzionali - AE.
Inoltre, grazie a questa reazione, è possibile determinare la specie o il tipo di esotossina. Questo è usato nella diagnosi di tetano, difterite, botulismo. Lo studio può essere effettuato sia “su vetro” che in gel.
Reazione della lisi (RL)
Il siero immunitario, che entra nel corpo del paziente, ha, oltre alla sua principale funzione di immunità passiva, anche proprietà lisanti. È in grado di dissolvere agenti microbici, elementi estranei cellulari e virus che entrano nel corpo del paziente. A seconda della specificità degli anticorpi inclusi nel siero, vengono isolate batteriolisine, citolisine, spirochetolizine, emolisine e altre.
Questi anticorpi specifici sono chiamati "complementi". Si trova in quasi tutti i fluidi del corpo umano, ha una struttura proteica complessa ed è estremamente sensibile all'aumento della temperatura, all'agitazione, agli acidi e alla luce solare diretta. Ma allo stato essiccato è in grado di trattenerele sue proprietà lisanti fino a sei mesi.
Ci sono questi tipi di reazioni sierologiche di questo tipo:
- batteriolisi;
- emolisi.
La batteriolisi viene effettuata utilizzando il siero del sangue del paziente e il siero immunitario specifico con microbi vivi. Se nel sangue è presente abbastanza complemento, il ricercatore vedrà i batteri lisarsi e la reazione sarà considerata positiva.
La seconda reazione sierologica del sangue è che una sospensione dei globuli rossi del paziente viene trattata con siero contenente emolisine, che si attivano solo in presenza di un certo complimento. Se ce n'è uno, l'assistente di laboratorio osserva la dissoluzione dei globuli rossi. Questa reazione è ampiamente utilizzata nella medicina moderna per determinare il titolo del complemento (cioè la sua quantità più piccola che provoca la lisi degli eritrociti) nel siero del sangue e per eseguire un'analisi per la fissazione del complemento. È in questo modo che viene eseguito un test sierologico per la sifilide - la reazione di Wasserman.
Reazione di fissazione del complemento (CFR)
Questa reazione viene utilizzata per rilevare gli anticorpi contro un agente infettivo nel siero del sangue del paziente, nonché per identificare l'agente patogeno in base alla sua struttura antigenica.
Fino a questo punto abbiamo descritto semplici reazioni sierologiche. L'RSK è considerata una reazione complessa, poiché in essa interagiscono non due, ma tre elementi: anticorpo, antigene e complemento. La sua essenza sta nel fatto che l'interazione tra l'anticorpo e l'antigenesi verifica solo in presenza di proteine del complemento, che vengono adsorbite sulla superficie del complesso AG-AT formato.
Gli antigeni stessi, dopo l'aggiunta del complemento, subiscono cambiamenti significativi, che mostrano la qualità della reazione. Può essere lisi, emolisi, immobilizzazione, azione battericida o batteriostatica.
La reazione stessa avviene in due fasi:
- Formazione di un complesso antigene-anticorpo che non è visivamente visibile all'esaminatore.
- Cambiamento dell'antigene sotto l'azione del complemento. Questa fase può essere molto spesso rintracciata ad occhio nudo. Se la reazione non è visivamente visibile, viene utilizzato un sistema di indicatori aggiuntivo per identificare i cambiamenti.
Sistema di indicatori
Questa reazione si basa sulla fissazione del complemento. Gli eritrociti di montone purificati e il siero emolitico privo di complemento vengono aggiunti alla provetta un'ora dopo l'impostazione dell'RSC. Se un complemento non legato rimane nella provetta, si unirà al complesso AG-AT formato tra i globuli di pecora e l'emolisina e li farà dissolvere. Ciò significa che RSK è negativo. Se gli eritrociti sono rimasti intatti, di conseguenza, la reazione è positiva.
Test di emoagglutinazione (RGA)
Ci sono due reazioni di emoagglutinazione fondamentalmente diverse. Uno di questi è sierologico, viene utilizzato per determinare i gruppi sanguigni. In questo caso, i globuli rossi interagiscono con gli anticorpi.
E il secondola reazione non si applica al sierologico, poiché i globuli rossi reagiscono con le emoagglutinine prodotte dai virus. Poiché ogni patogeno agisce solo su specifici eritrociti (pollo, agnello, scimmia), questa reazione può essere considerata altamente specifica.
Puoi dire se una reazione è positiva o negativa dalla posizione dei globuli sul fondo della provetta. Se il loro schema ricorda un ombrello capovolto, il virus desiderato è presente nel sangue del paziente. E se tutti gli eritrociti si sono formati come una colonna di monete, allora non ci sono agenti patogeni desiderati.
Test di inibizione dell'emoagglutinazione (HITA)
Questa è una reazione altamente specifica che consente di determinare il tipo, il tipo di virus o la presenza di anticorpi specifici nel siero del sangue del paziente.
La sua essenza sta nel fatto che gli anticorpi aggiunti alla provetta con il materiale del test impediscono la deposizione di antigeni sugli eritrociti, bloccando così l'emoagglutinazione. Questo è un segno qualitativo della presenza nel sangue di antigeni specifici per il virus specifico ricercato.
Reazione di immunofluorescenza (RIF)
La reazione si basa sulla capacità di rilevare complessi AG-AT con la microscopia a fluorescenza dopo il loro trattamento con coloranti fluorocromi. Questo metodo è facile da maneggiare, non richiede l'isolamento della coltura pura e richiede poco tempo. È indispensabile per la diagnosi rapida delle malattie infettive.
In pratica, queste reazioni sierologiche si dividono in due tipi: dirette e indirette.
Direct RIF è prodotto daantigene, che viene pretrattato con siero fluorescente. E quello indiretto è che prima il farmaco viene trattato con un diagnosticum convenzionale contenente antigeni per gli anticorpi di interesse, quindi viene riapplicato il siero luminescente, specifico per le proteine del complesso AG-AT, e le cellule microbiche diventano visibili al microscopio.
